Zeitschrift für Molekularbiologie und Methoden

Vergleich der Geschlechtsbestimmung bei Rattenföten anhand von plazentarer gDNA und mRNA mittels qRT-PCR

Anthony L Su und Rita Loch-Caruso

Es besteht ein wachsender Bedarf, das fetale Geschlecht als biologische Variable zu berücksichtigen und geschlechtsspezifische Auswirkungen genau zu beurteilen. Unter den verschiedenen Methoden zur Bestimmung des fetalen Geschlechts wird häufig die quantitative Echtzeit-Polymerase-Kettenreaktion (qRT-PCR) von Sry (geschlechtsbestimmende Region Y) mit genomischer DNA (gDNA) verwendet, zusätzlich zu Methoden wie Transkriptomik und Barr-Körper-Erkennung. Sry-Messenger-RNA (mRNA), ein Produkt von Sry-gDNA, wurde jedoch bisher nicht zur Geschlechtsbestimmung untersucht. In dieser Studie wurde anhand von Plazentaproben von zeitgerecht trächtigen Wistar-Ratten am 16. Gestationstag (GD) die Kompatibilität der Sry-Erkennung mittels gDNA gegenüber mRNA zur Bestimmung des fetalen Geschlechts untersucht. Die in dieser Studie verwendeten Proben stammen aus einer größeren Studie, in der die Reproduktionstoxizität von Trichlorethylen (TCE) und die mögliche Modulation durch N-Acetyl-L-Cystein (NAC) und Aminooxyessigsäure (AOAA) untersucht wurden. Bei 90 von 91 Proben stimmte die durch gDNA ermittelte Geschlechtsklassifizierung mit der durch mRNA ermittelten Geschlechtsklassifizierung überein, die durch Analyse der Sry-Werte (Sry/B2m) ermittelt wurde. Sowohl für gDNA als auch für mRNA wurden statistisch signifikante Unterschiede in den Sry/B2m-Werten zwischen Männchen und Weibchen beobachtet, sowohl bei der Gesamtbetrachtung der Proben als auch bei der Trennung der Proben nach Behandlungsgruppen (alle Vergleiche waren p<0,01 oder darunter, und alle Vergleiche außer zwei waren p<0,001 oder darunter). Abschließend wurde auch die Gültigkeit der Verwendung von SryCq-Werten zur Bestimmung des fetalen Geschlechts und des B2m-Referenzgens diskutiert. Zusammengenommen legt diese Studie nahe, dass die Bestimmung des fetalen Geschlechts bei Wistar-Ratten durch Sry-Messungen in gDNA oder mRNA mit sehr kompatiblen Ergebnissen erfolgen kann.