Zeitschrift für immunologische Techniken und Infektionskrankheiten

Etablierung der Echtzeit-Fluoreszenz-quantitativen Polymerase-Kettenreaktion (PCR) zum Nachweis des hochpathogenen Vogelgrippevirus-Subtyps H5N1

Miao-lian Tan, Yuan-yuan Niu, Wei Shui, Jiancong Lin, Ming Li und Changran Zhang

Hochpathogene Stämme des Vogelgrippevirus (AIV), bei denen es sich um Influenzaviren der Klasse A handelt, verursachen schwere Erkrankungen bei Hausgeflügel und Menschen. Ziel dieser Studie war die Entwicklung eines quantitativen fluoreszierenden RT-PCR-Tests zum Nachweis des hochpathogenen Vogelgrippevirus (AIV) des Subtyps H5N1. Die H5- und N1-subtypspezifischen Sondensätze wurden auf Grundlage von in China nachgewiesenen Vogelgrippevirussequenzen entwickelt. Zwei Primerpaare und zwei Fluoreszenzsonden wurden streng entworfen und in einem Reaktionssystem optimiert. Entsprechend der Menge der aus den H5N1-Stämmen extrahierten Plasmid-RNA wurde die Standardkurve DWQBGWDWQBGW der quantitativen Fluoreszenz-PCR erstellt und alle Proben wurden anschließend mittels Echtzeit-PCR getestet. Der Test auf den hochpathogenen AIV-Subtyp H5N1 erwies sich als spezifisch und seine Sensitivität lag bei 102–103 Kopien/Reaktion. Die Standardkurve wurde bei 109–105 DNA-Kopien/Reaktion erreicht. Von der Extraktion der Virus-RNA bis zum Abschluss des Tests dauerte es nur drei Stunden. Der Test war einfach durchzuführen und sehr reproduzierbar. Zusammenfassend lässt sich sagen, dass die hier beschriebene quantitative Fluoreszenz-PCR eine schnelle, spezifische und empfindliche Methode darstellt, um nicht nur die H5-, sondern auch die N1-Gene zu erkennen.