Zeitschrift für immunologische Techniken und Infektionskrankheiten

Optimierung des Lateral Flow Assays zum Nachweis des Caninen Morbillivirus und die Verwendung des Streifens als Probenersatz

Monu Karki*, KK Rajak, Praveen Singh, Arfa Fayaz, Kiran, Mukesh Bhatt, Vishal Rai, Chris Einstein, Ajay Kumar Yadav und RP Singh

Staupe ist eine neu auftretende Krankheit, die durch das Canine Morbillivirus (CDV) aus der Familie der Paramyxoviridae verursacht wird. Das Virus hat sich zu einem Multiwirtserreger entwickelt, da es viele Wildtierarten befällt. Die Entwicklung spezifischer und sensitiver Diagnosetests ist die Voraussetzung für ein Kontrollprogramm. Zum Nachweis von CDV-Antigenen und -Antikörpern stehen verschiedene Diagnosetests zur Verfügung. Der Lateral-Flow-Test (LFA) ist aufgrund seiner Spezifität, einfachen Anwendung und sofortigen Ergebnisse der vielversprechendste Point-of-Care-Diagnosetest. Ziel dieser Studie war die Entwicklung eines Lateral-Flow-Tests unter Verwendung des selbst entwickelten monoklonalen Antikörpers (mAb) gegen das Nukleokapsidprotein (N) des Isolats „CDV/dog/bly/Ind/2018“, das die in Indien zirkulierenden Stämme repräsentiert. Die beiden in die Studie einbezogenen mAbs zeigten eine hohe Bindungsaffinität im indirekten ELISA- und Dot-Blot-Test. Von zweien wurde ein mAb aufgrund seiner vergleichsweise höheren Bindungsaffinität im LFA-Format und einer geringeren unspezifischen Bindung an die biologische Matrix und Pufferkomponenten ausgewählt. Die vor Ort gesammelten frischen klinischen Proben wurden vom LFA deutlich erkannt, während die gelagerten Proben mit einem reduzierten Virustiter inkonsistente Ergebnisse zeigten. Darüber hinaus zeigten die Blutproben eine klarere Unterscheidung zwischen positiv und negativ als die Abstrich- und Gewebehomogenate. Die RNA-Extraktion aus dem Streifen war mit einigen Modifikationen der Trizol-RNA-Extraktionsmethode erfolgreich und die N- und H-Genfragmente wurden amplifiziert. Daher kommt die Studie zu dem Schluss, dass der LFA für den Nachweis von CDV-Antigenen unter Feldbedingungen geeignet ist und die Streifen als Probenersatz für molekulare Studien verwendet werden können.