Zeitschrift für immunologische Techniken und Infektionskrankheiten

Fluoreszenz-Mikrosphären-Immunoassay zum Nachweis von Antikörpern gegen das Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus und das Porcine Circovirus Typ 2 unter Verwendung von Protein A, Protein G und Protein A/G

Mohammad M Hossain und Raymond RR Rowland

Der Zweck dieser Studie war die Entwicklung eines Multiplex-Fluoreszenz-Mikrokügelchen-Immunassays (FMIA) zum Nachweis von porcinem Reproduktiv- und Respiratorischem Syndrom-Virus (PRRSV) und porcinem Circovirus Typ 2 (PCV2)-spezifischen IgG-Antikörpern durch Einbau der nicht-speziesspezifischen Konjugate Protein A, G und A/G anstelle des sekundären Antikörpers. Insgesamt wurden 205 Serumproben von experimentell mit PRRSV und/oder PCV2 infizierten Schweinen getestet. Zur Herstellung rekombinanter Antigene wurden PRRSV-Nukleoprotein (N) und PCV2-Kapsidprotein (CP) in Escherichia coli exprimiert und auf einer Nickel-Affinitätssäule gereinigt. Die gereinigten Proteine ​​wurden kovalent an carboxylierte Mikrokügelchen gekoppelt. Vier Zielantigene wurden zu einem einzigen Multiplex zusammengefasst und gegen Seren von Schweinen getestet, die mit PRRSV oder PCV2 infiziert oder koinfiziert waren. Protein A, G und A/G wurden anstelle des sekundären konjugierten Schweine-IgG getestet. Alle Konjugate waren in der Lage, Antikörper zu erkennen, und die Erkennung von IgG-Reaktionen gegen PRRSV- und PCV2-Antigenziele wurde mit A> A/G> G variiert. In Ermangelung artspezifischer Reagenzien stellt die Einbeziehung von Protein A, G und A/G einen geeigneten Ersatz dar.