Zeitschrift für Veterinärwissenschaft und medizinische Diagnose

Untersuchung von Stämmen des Infektiösen Bronchitisvirus mittels Echtzeit-RT-PCR und S1-Gensequenzierung bei Masthähnchen

Engin Alp Onen und Yakut Ozgur

Ziel dieser Studie war die Erkennung des infektiösen Bronchitisvirus (IBV) in Trachealabstrichproben von Hühnern mittels Echtzeit-RT-PCR, die als schnelle und sensible Methode zur Viruserkennung gilt. Die phylogenetischen Beziehungen in verschiedenen Feld- und Variantenstämmen von IBV wurden durch Sequenzierung der hypervariablen Regionen (HVRs) des S1-Gens von IBV bestimmt. Trachealabstriche wurden nach dem Zufallsprinzip von 120 Masthühnern mit Atemwegssymptomen entnommen. Die Proben wurden in die Allantoisflüssigkeit (AF) von SPF-embryonierten Hühnereiern inokuliert. RNAs wurden mittels AF extrahiert. RNAs wurden in ss-cDNAs übersetzt. Echtzeit-RT-PCR wurde mit einer doppelt markierten Taqman-Sonde und den Primerpaaren IBV 5 GU391 und IBV5 GL533 durchgeführt. Positive Ergebnisse wurden bei 33 von 120 Proben (27,5 %) mittels Echtzeit-RT-PCR erzielt. cDNAs aus positiven Proben wurden zur Amplifikation von HVRs (Hyper Variable Regions) in der S1-Genregion mit C2U- und Ag0723-Primern verwendet. Die Proben wurden außerdem mit S1 5'mod- und CK2-Primern amplifiziert. RT-PCR-Produkte wurden direkt sequenziert. Die Sequenzierungsergebnisse wurden mit der Nukleotiddatenbank des NCBI verglichen. Die Sequenzierungsergebnisse stimmten zu 72-86 % mit einigen varianten IBV-Stämmen in der Genbankdatenbank überein. Diese Ergebnisse untermauern, dass wir es mit varianten IBV-Stämmen zu tun haben. Außerdem haben wir viele entsprechende SNP-Mutationen beobachtet. Diese Studie zeigt, dass Vögel zu 27,5 % mit varianten IBV-Stämmen infiziert werden können, obwohl sie mit einem Impfstoff des klassischen Typs geimpft wurden. Diese Ergebnisse zeigen, dass eine Impfung mit klassischen IBV-Impfstoffstämmen keinen ausreichenden Kreuzschutz gegen variantenreiche Stämme bieten kann. Daher kommt es in geimpften Herden weiterhin zu Krankheitsausbrüchen. Außerdem stellten wir fest, dass diese Primer nicht ausreichen, um alle IBV-Feldstämme zu sequenzieren und zu klassifizieren. Daher müssen verschiedene Primer entwickelt und mehr als zwei Primerpaare verwendet werden. In diesem Experiment stellten wir fest, dass die Viruslast in AF höher ist als in Abstrichproben, da sich IBV in SPF-Ei-AF repliziert. Wir beobachteten Zwergwuchs und Blutungen bei 14 Tage alten Hühnerembryonen