Zeitschrift für Veterinärwissenschaft und medizinische Diagnose

Entwicklung eines Enzymimmunoassays auf Basis rekombinanter Nukleokapsidproteine ​​zum serologischen Nachweis der Winterruhr

Kanokwan Singasa, Taweesak Songserm, Preeda Lertwatcharasarakul, Siriluk Jala, Sakuna Phattanakunanan und Pipat Arunvipas

Winterruhr ist eine akute und ansteckende Viruserkrankung, die Milchkühe auf thailändischen Farmen schädigt. Ein indirekter Enzymimmunoassay (ELISA) auf Basis des rekombinanten Nukleokapsidproteins (rN), das zur Erkennung von Antikörpern gegen Winterruhr entwickelt wurde, wurde mithilfe eines Proteinexpressionssystems von Escherichia coli hergestellt. Das Epitopantigen-N-Protein wurde unter Verwendung fast aller N-Genfragmente (8-430 aa, N-Gen) entwickelt. Es wurde als etwa 48 kDa großes rN-Protein identifiziert und kann durch Western-Blot-Analyse an Serum von Rindercoronavirus-positivem Milchvieh binden. Die Bedingungen der ELISA-Methode wurden optimiert. Das rN-Protein wurde mit einer Antigenkonzentration von 5 μg/Well standardisiert. Das rN-Protein wurde mit Seren von infiziertem und nicht infiziertem Milchvieh getestet. Die Verdünnung der primären Antikörper wurde mithilfe einer Schachbretttitration als 1:50 ermittelt. Die Intra- und Interassays waren wiederholbar. Der Cut-off des korrigierten OD450-Werts vom Mittelwert ± 2SD (Standardabweichungen) wurde auf 0,049 festgelegt. Der Prozentsatz an Spezifität, Sensitivität und Genauigkeit zwischen dem entwickelten rNELISA und einem SVANOVIR® BCV-Ab ELISA-Kit betrug 96,3, 84,8 bzw. 86,1 %. Cohens Kappa-Wert des entwickelten ELISA im Vergleich zum kommerziellen Testkit betrug 0,71. Der Korrelationskoeffizient der Absorptionswerte aus diesen beiden Tests betrug 0,68. Die ELISA-Methode mit rekombinantem Nukleokapsidprotein könnte für die Diagnose und Überwachung des bovinen Coronavirus hilfreich sein.