Zeitschrift für Veterinärwissenschaft und medizinische Diagnose

Anwendung rekombinanter Histidin-markierter Antigene in der Diagnostik viraler Infektionen

Mohammad M Hossain und Raymond R Rowland

Histidinmarkierte Proteine ​​werden häufig mit Antikörpern nachgewiesen. Histidinmarkierte Proteine ​​werden häufig mit Antikörpern nachgewiesen, die spezifisch für die Histidinmarkierung sind. Diese sind in immunologischen Studien nützlich. Ein Penta-His-monoklonaler Antikörper (mAb) wurde verwendet, um die relative Menge an rekombinantem Protein zu bestimmen, das an jedem Mikrokügelchen-Set in einem fluoreszierenden Mikrokügelchen-Immunoassay (FMIA) anhaftet. In dieser Studie wurde die Verwendung des Anti-His-mAb zur Erkennung rekombinanter Antigene von sieben verschiedenen Tierviren getestet: Porcines Reproduktives und Respiratorisches Syndromvirus (PRRSV), Porcines Circovirus Typ 2 (PCV2), Schweineinfluenzavirus (SIV), Afrikanisches Schweinepestvirus (ASFV), Klassisches Schweinepestvirus (CSFV), Bovines Virusdiarrhoevirus (BVDV) und Rifttalfiebervirus (RVFV), die nach der Kopplung an Mikrokügelchen gebunden waren. Proteine ​​wurden als 6xHis-Ubiquitin-Fusionsprotein hergestellt und kovalent an Luminex MagPlex® Polystyrol, carboxylierte Mikrokügelchen, gekoppelt. Die Zielantigene wurden zu einem einzigen Multiplex zusammengesetzt und in Gegenwart von Anti-His-Tag-mAb getestet. Die Ergebnisse wurden als mittlere Fluoreszenzintensität (MFI) angegeben. Die Interaktion zwischen His-markierten rekombinanten Antigenen und Anti-His-Tag-mAb wurde mithilfe eines His-Tag-blockierenden Peptids getestet. Die Ergebnisse des His-Tag-blockierenden Tests zeigten, dass 1 μg/ml His-Tag-blockierendes Peptid die Interaktion von His-markierten Antigenen und Anti-HismAb vollständig hemmen kann. Die MFI-Werte für die negativen Serumproben zeigten eine 10- bis 40-fache Reduktion im Vergleich zu PRRSV-N-, PCV2-, SIV-, ASFV-, CSFV- und BVDV-positiven Seren. Daher bietet die Verwendung des Anti-His-mAb ein praktisches Mittel zur Beurteilung der Antigenbindung an Kügelchen.

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